ԳՁՕ բերքի արդյունահանման և ուժեղացման հավաքածու

Հատկապես հարմար է ԳՁՕ բերքի արդյունահանման և տրանսգենային PCR հայտնաբերման համար:

GMO Crop Extraction & Amplification Kit- ը հատուկ մշակված է ԳՁՕ մշակաբույսերի PCR հայտնաբերման համար: Լիզի յուրահատուկ բուֆերը, որը պարունակվում է հավաքածուի Ա մասում, կարող է հատուկ լիզել հիմնական մշակաբույսերի ՝ ցորենի, եգիպտացորենի, բրնձի, բամբակի և սոյայի հյուսվածքները ՝ ազատելու հարակից բաղադրիչներ, ինչպիսիք են նուկլեինաթթուները և սպիտակուցները: Ֆենոլի/քլորոֆորմի արդյունահանումը, որը զուգորդվում է հատուկ RNase- ի հետ, կարող է մաքրել բարձր մաքրության գենոմային ԴՆԹ-ն ՝ առանց կեղտերի, ինչպիսիք են ՌՆԹ-ն, սպիտակուցը և մետաղական իոնները: Մաքրված ԴՆԹ -ն կարող է կիրառվել PCR- ի հետագա հայտնաբերման ժամանակ: Հավաքածուի B մասը երկու բաղադրիչ պարզ PCR ռեակցիայի համակարգ է, որը պարունակում է 2 × GMO PCR բուֆեր և GMO DNA Polymerase: GMO DNA Polymerase- ը հակամարմիններով փոփոխված ջերմակայուն պոլիմերազ է: 2 × GMO PCR բուֆերը պարունակում է տարբեր բաղադրիչներ, ինչպիսիք են MgCl2, dNTPs, PCR ռեակցիայի կայունացուցիչ, օպտիմալացնող և ուժեղացուցիչ `2 × ԳՄՕ կոնցենտրացիայի դեպքում: Այն ունի արագ և պարզ աշխատանքի առավելություններ, բարձր զգայունություն, ուժեղ յուրահատկություն, լավ կայունություն և այլն: Այն կարող է օգտագործվել A մասի հետ համատեղ `ԳՁՕ բերքի տրանսգենային PCR հայտնաբերման համար:

Կատու Ոչ Փաթեթավորման չափը
4992905 200 ռ

 

 


Ապրանքի մանրամասն

Փորձարարական օրինակ

ՀՏՀ

Ապրանքի պիտակներ

Հատկություններ

■ Լայն կիրառելիություն. Այս հավաքածուն կարող է քաղել բարձրորակ գենոմային ԴՆԹ հինգ հիմնական ԳՁՕ մշակաբույսերից:
■ Պարզ և արագ. GMO- ի գենոմային ԴՆԹ -ի արդյունահանումը կարող է ավարտվել 2 ժամվա ընթացքում: Անհրաժեշտ չէ մեծ սառնարանային ցենտրիֆուգներ, գործիքների և սարքավորումների ցածր պահանջներ: Հարմար է ԳՄՕ մշակաբույսերի գենոմային ԴՆԹ -ի արագ արդյունահանման համար `բոլոր մակարդակի հետազոտական ​​հաստատություններում:
■ Բարձր արդյունավետություն և յուրահատկություն. Հակամարմիններով փոփոխված Taq պոլիմերազի յուրահատուկ բուֆերն ապահովում է պոլիմերազի արդյունավետ ուժեղացում, որն ավելի կոնկրետ է, քան սովորական Taq պոլիմերազը:

Րագրեր

Հավաքածուն կարող է քաղել բարձրորակ գենոմային ԴՆԹ հիմնական ԳՄՕ մշակաբույսերից, ինչպիսիք են ցորենը, եգիպտացորենը, բրինձը, բամբակը և սոյան, և իրականացնել գենետիկորեն ձեւափոխված ԳՁՕ մշակաբույսերի տրանսգենային PCR հայտնաբերում:

Բոլոր ապրանքները կարող են հարմարեցվել ODM/OEM- ի համար: Մանրամասների համար ՝սեղմեք Անհատականացված ծառայություն (ODM/OEM)


  • Նախորդ:
  • Հաջորդը:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Գենոմային ԴՆԹ -ի արդյունահանում
    Գենոմային ԴՆԹ -ի արդյունահանումը կատարվել է համապատասխանաբար 100 մգ բրնձի, եգիպտացորենի, սոյայի, բամբակի և ցորենի տերևների վրա: Փորձը կրկնվեց երկու անգամ: Ընդհանուր 100 մկլ լուսատուներից 3 μL ԴՆԹ -ն բեռնվել է մեկ երթևեկելի գոտի:
    Ագարոզայի գելի կոնցենտրացիան կազմել է 2%: Էլեկտրոֆորեզը կատարվել է 6 Վ/սմ -ի սահմաններում 20 րոպե տևողությամբ:
    D15000 ՝ TIANGEN D15000 ԴՆԹ նշիչ:
    Experimental Example PCR հայտնաբերում
    Բրնձի, եգիպտացորենի, սոյայի, բամբակի և ցորենի գենոմային ԴՆԹ -ն համապատասխանաբար ուժեղացվել է: Փորձը կրկնվեց երկու անգամ: Ընդհանուր 20 մկլ ռեակցիոն համակարգից 6 մկլ բեռնվել է մեկ գոտի:
    Ագարոզայի գելի կոնցենտրացիան կազմել է 2%: Էլեկտրոֆորեզը կատարվել է 6 Վ/սմ -ի սահմաններում 20 րոպե տևողությամբ:
    D15000 ՝ TIANGEN D15000 ԴՆԹ նշիչ:
    Q: Չկա ուժեղացման գոտիներ

    A-1 կաղապար

    ■ Կաղապարը պարունակում է սպիտակուցային խառնուրդներ կամ Taq ինհիբիտորներ և այլն: —— Մաքրել ԴՆԹ ձևանմուշը, հեռացնել սպիտակուցային կեղտերը կամ հանել մաքրման հավաքածուներով ԴՆԹ ձևանմուշը:

    Temp Կաղապարի հետադարձումը լիարժեք չէ. —Համապատասխանաբար բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել Denaturation time- ը:

    ■ Կաղապարի դեգրադացիա —— Կրկին պատրաստեք կաղապարը:

    A-2 այբբենարան

    Prim Նախնական այբբենարանների վատ որակը.

    ■ Այբբենարանի քայքայումը —— բարձր կոնցենտրացիայի հիմքերը փոքր ծավալի բաժանեք պահպանման համար: Խուսափեք բազմակի սառեցումից և հալվելուց կամ երկարաժամկետ 4 ° C ջերմաստիճանի սառեցման պահպանումից:

    Prim այբբենարանների ոչ պատշաճ ձևավորում (օր. Այբբենարանի երկարությունը բավարար չէ, հիմքը ձևավորվում է այբբենարանների միջև և այլն)

    A-3 մգ2+համակենտրոնացում

    Մգ2+ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն2+ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը2+ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար2+ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

    A-4 Կռման ջերմաստիճան

    An Խտացման բարձր ջերմաստիճանը ազդում է այբբենարանի և կաղապարի կապման վրա: - Կրճատել կռացման ջերմաստիճանը և օպտիմալացնել վիճակը 2 ° C գրադիենտով:

    A-5 Երկարացման ժամանակ

    Extension Կարճաժամկետ երկարացում —— Բարձրացրեք երկարացման ժամանակը:

    Հարց. Կեղծ դրական

    Երեւույթներ. Բացասական նմուշները ցույց են տալիս նաեւ թիրախային հաջորդականության գոտիները:

    A-1 PCR- ի աղտոտում

    Target Թիրախային հաջորդականության կամ ուժեղացման արտադրանքի խաչաձև աղտոտում. Ռեակտիվները կամ սարքավորումները պետք է ավտոկլավավորվեն `գոյություն ունեցող նուկլեինաթթուները վերացնելու համար, իսկ վարակման առկայությունը պետք է որոշվի բացասական հսկողության փորձերի միջոցով:

    ■ Ռեագենտով վարակվածություն.

    A-2 Primer

    Մգ2+ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն2+ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը2+ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար2+ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

    Prim Այբբենարանի ոչ պատշաճ ձևավորում, և թիրախային հաջորդականությունն ունի հոմոլոգիա ոչ նպատակային հաջորդականության հետ: —— Նախաստեղծ այբբենարաններ:

    Հ. Ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացում

    Ֆենոմեններ. PCR ուժեղացման գոտիները անհամապատասխան են սպասվող չափին ՝ մեծ կամ փոքր, երբեմն էլ լինում են ինչպես հատուկ ուժեղացման գոտիներ, այնպես էլ ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացման գոտիներ:

    A-1 այբբենարան

    Prim Այբբենարանի վատ յուրահատկություն

    —— Նոր դիզայնի այբբենարան:

    ■ Նախաներկի կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է. —Roիշտ բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել դենատուրացիայի ժամանակը:

    A-2 մգ2+ համակենտրոնացում

    The Mg2+ կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg2+ կոնցենտրացիան2+ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար2+ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

    A-3 rmերմակայուն պոլիմերազա

    En Չափից մեծ ֆերմենտի քանակ - —Պակասեցրեք ֆերմենտի քանակը համապատասխանաբար 0.5 U ընդմիջումներով:

    A-4 Կռման ջերմաստիճան

    An Կռման ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է .— increaseիշտ բարձրացնել կռացման ջերմաստիճանը կամ ընդունել երկաստիճան հովացման մեթոդը

    A-5 PCR ցիկլեր

    PC Չափից շատ PCR ցիկլեր —— Կրճատեք PCR ցիկլերի քանակը:

    Հարց. Կպչուն կամ քսելու խմբեր

    A-1 այբբենարան—————————––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––————————————————————————————————————————————————————————————————— -րագրի վերափոխում, փոխում այբբենարանի դիրքն ու երկարությունը ՝ դրա յուրահատկությունը բարձրացնելու համար. կամ կատարել ներկառուցված PCR:

    A-2 Կաղապար ԴՆԹ

    —— Կաղապարը մաքուր չէ —— Մաքրեք կաղապարը կամ հանեք ԴՆԹ – ն մաքրման հավաքածուներով:

    A-3 մգ2+ համակենտրոնացում

    —— Մգ2+ համակենտրոնացումը չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg– ն2+ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը2+ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար2+ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

    A-4 dNTP

    —— dNTP– ների կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— համապատասխանաբար նվազեցնել dNTP– ի կոնցենտրացիան

    A-5 Կռման ջերմաստիճան

    —— Շատ ցածր հալման ջերմաստիճան —— increaseիշտ բարձրացնել հալման ջերմաստիճանը

    A-6 ցիկլեր

    —— Չափից շատ ցիկլեր —— Օպտիմալացրեք ցիկլի համարը

    Հարց. Որքա՞ն կաղապարային ԴՆԹ պետք է ավելացվի 50 μl PCR ռեակցիայի համակարգում:
    ytry
    Հ. Ինչպե՞ս երկարացնել բեկորները:

    Առաջին քայլը համապատասխան պոլիմերազի ընտրությունն է: Սովորական Taq պոլիմերազան չի կարող սրբագրել 3'-5 'էզոնուկլազի ակտիվության բացակայության պատճառով, և անհամապատասխանությունը մեծապես կնվազեցնի բեկորների երկարացման արդյունավետությունը: Հետևաբար, սովորական Taq պոլիմերազը չի կարող արդյունավետորեն ուժեղացնել 5 կբ -ից ավելի թիրախային բեկորները: Հատուկ փոփոխությամբ կամ բարձր հավատարմությամբ պոլիմերազով Taq պոլիմերազը պետք է ընտրվի երկարացման արդյունավետությունը բարձրացնելու և բեկորների երկարատև ուժեղացման կարիքները բավարարելու համար: Բացի այդ, երկար բեկորների ուժեղացումը պահանջում է նաև այբբենարանի դիզայնի համապատասխան ճշգրտում, դենատուրացիայի ժամանակ, երկարացման ժամանակ, բուֆերային pH և այլն: Կաղապարի վնասը կանխելու համար 94 ° C- ում դենատուրացիայի ժամանակը պետք է կրճատվի մինչև 30 վրկ կամ ավելի մեկ ցիկլով, իսկ ջերմաստիճանը մինչև 94 ° C բարձրացնելուց առաջ ՝ 1 րոպեից պակաս: Ավելին, երկարացման ջերմաստիճանը մոտ 68 ° C- ով սահմանելը և երկարացման ժամանակը նախագծելը `1 կբ/րոպե արագության համաձայն, կարող են ապահովել երկար բեկորների արդյունավետ ուժեղացում:

    Հ. Ինչպե՞ս բարելավել PCR- ի ուժեղացման հավատարմությունը:

    PCR- ի ուժեղացման սխալի մակարդակը կարող է նվազեցվել ՝ օգտագործելով բարձր հավատարմությամբ տարբեր ԴՆԹ պոլիմերազներ: Մինչ այժմ հայտնաբերված Taq ԴՆԹ -ի պոլիմերազներից Pfu ֆերմենտն ունի ամենացածր սխալի տոկոսադրույքը և ամենաբարձր հավատարմությունը (տես կցված աղյուսակը): Ֆերմենտի ընտրությունից բացի, հետազոտողները կարող են հետագայում նվազեցնել PCR մուտացիայի արագությունը `օպտիմալացնելով ռեակցիայի պայմանները, ներառյալ բուֆերային կազմի օպտիմալացումը, ջերմակայուն պոլիմերազի կոնցենտրացիան և PCR ցիկլի օպտիմալացումը:

    Գրեք ձեր հաղորդագրությունը այստեղ և ուղարկեք մեզ