TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

PCR- ի հայտնաբերման համար տարբեր նյութերից ԴՆԹ -ի արագ մաքրում:

TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit- ն ընդունում է փաթեթավորման յուրահատուկ դիզայն, որը ներառում է ԴՆԹ -ի գենոմային արագ պատրաստման և PCR ուժեղացման բոլոր ռեակտիվները: Այն կիրառելի է տարբեր նմուշներից (բուսական հյուսվածքներ, սերմեր, կենդանիների հյուսվածքներ, արյուն, խմորիչ և բակտերիաներ) գենոմի ԴՆԹ-ի մեկ աստիճանի մաքրման և հետագա PCR ուժեղացման և հայտնաբերման համար: Սպիտակուցի, ՌՆԹ -ի և երկրորդային մետաբոլիտների հեռացում, օրգանական լուծիչների արդյունահանում, ինչպես նաև էթանոլի նստեցման քայլեր անհրաժեշտ չեն ամբողջ մաքրման գործընթացում ՝ գործողությունը դարձնելով պարզ և արագ: Ապրանքի որակը կայուն է և հուսալի:

Այս կոմպլեկտով տրամադրված 2 -Det PCR MasterMix- ը բարձր համատեղելի PCR ռեակտիվ է, որը կարող է արդյունավետ և հատուկ ուժեղացնել ԴՆԹ -ն ՝ առանց սպիտակուցների, ինչպիսիք են սպիտակուցները հեռացնելու անհրաժեշտությունը: Այս ռեակտիվը պարունակում է Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, բուֆեր, ինչպես նաև PCR ռեակցիայի ուժեղացուցիչ, օպտիմալացնող և կայունացուցիչ: Ռեագենտի կիրառումը PCR ռեակցիան դարձնում է արագ, պարզ, զգայուն, յուրահատուկ և կայուն: Հետեւաբար, այս հավաքածուն հատկապես հարմար է բարձր թողունակության ցուցադրման համար:

Կատու Ոչ Փաթեթավորման չափը
4992527 20 μl × 50 rxn
4992528 20 μl × 200 rxn

 

 


Ապրանքի մանրամասն

Փորձարարական օրինակ

ՀՏՀ

Ապրանքի պիտակներ

Հատկություններ

■ Պարզ և արագ. Տարբեր հյուսվածքներից ԴՆԹ -ն կարող է արդյունահանվել 5 րոպեում ՝ առանց հեղուկ ազոտի մանրացման անհրաժեշտության:
■ Լայն կիրառումներ. Կիրառելի է բույսերի տերևների, սերմերի, կենդանիների հյուսվածքների, արյան նմուշների (թարմ արյան, հակակոագուլյացիայի, արյան հյուսվածքի, արյան չորացած բծերի և այլն), խմորիչների և բակտերիաների համար:
Rong Ուժեղ համատեղելիություն. PCR ռեակտիվը հարմար է տարբեր նմուշների աղբյուրներից արդյունահանվող ԴՆԹ -ի ուժեղացման համար:

Րագրեր

■ Գենի հայտնաբերում. Իդեալական ընտրություն լայնածավալ գենի հայտնաբերման համար:

Կարևոր գրառումներ

Phen Ֆենոլների բարձր մակարդակ պարունակող նմուշների համար, ինչպիսիք են բամբակի տերևները, նմուշի ներմուծման քանակը պետք է խստորեն 0.4 մգ -ից պակաս լինի, այլապես PCR արձագանքը կազդի:

Բոլոր ապրանքները կարող են հարմարեցվել ODM/OEM- ի համար: Մանրամասների համար ՝սեղմեք Անհատականացված ծառայություն (ODM/OEM)


  • Նախորդ:
  • Հաջորդը:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Exampl ԴՆԹ -ն արդյունահանվել է համապատասխանաբար եգիպտացորենի, ցորենի, բրնձի, սոյայի և բամբակի տերևներից և սերմերից 5 մգ: ԴՆԹ -ն ուժեղացվել է PCR- ով `օգտագործելով հատուկ պրիմերներ: Ընդհանուր 20 մկլ լուսատուներից 6 μl ԴՆԹ -ն բեռնվել է մեկ երթևեկելի գոտի:
    1: Դրական վերահսկողության գենոմ; 2: թողնել նմուշներ; 3 ՝ սերմերի նմուշներ; 4: NTC; 5: D2000 այբբենարաններ
    Experimental Example M: TIANGEN Մարկեր D2000; 1: Դրական վերահսկողություն;
    2-7. Theտիչ թղթի վրա արյան չորացած բծերի քանակը համապատասխանաբար 1-6 է. 8: Բացասական վերահսկողություն:
    3 մմ դակիչն օգտագործվել է ֆիլտրի թղթից արյան չորացած բծերը վերցնելու համար ՝ որպես արդյունահանման թեստի նյութ:
    Ընդհանուր 20 մկլ լուսատուներից 6 մկլ ԴՆԹ -ն բեռնվել է մեկ գոտի:
    Experimental Exampl M: TIANGEN Մարկեր D2000; 1. Դրական վերահսկողություն (գենոմային ԴՆԹ -ն օգտագործվել է որպես կաղապար); 2-7: Ավելացված արյան քանակը համապատասխանաբար 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl և 60 μl; 8-13. Ավելացված արյան քանակը `համապատասխանաբար 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl և 60 μl; 14: NTC
    Ընդհանուր 20 մկլ լուսատուներից 6 մկլ ԴՆԹ -ն բեռնվել է ագարոզայի գելի վրա:
    Q: Չկա ուժեղացման գոտիներ

    A-1 կաղապար

    ■ Կաղապարը պարունակում է սպիտակուցային խառնուրդներ կամ Taq ինհիբիտորներ և այլն: —— Մաքրել ԴՆԹ ձևանմուշը, հեռացնել սպիտակուցային կեղտերը կամ հանել մաքրման հավաքածուներով ԴՆԹ ձևանմուշը:

    Temp Կաղապարի հետադարձումը լիարժեք չէ. —Համապատասխանաբար բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել Denaturation time- ը:

    ■ Կաղապարի դեգրադացիա —— Կրկին պատրաստեք կաղապարը:

    A-2 այբբենարան

    Prim Նախնական այբբենարանների վատ որակը.

    ■ Այբբենարանի քայքայումը —— բարձր կոնցենտրացիայի հիմքերը փոքր ծավալի բաժանեք պահպանման համար: Խուսափեք բազմակի սառեցումից և հալվելուց կամ երկարաժամկետ 4 ° C ջերմաստիճանի սառեցման պահպանումից:

    Prim այբբենարանների ոչ պատշաճ ձևավորում (օր. Այբբենարանի երկարությունը բավարար չէ, հիմքը ձևավորվում է այբբենարանների միջև և այլն)

    A-3 մգ2+համակենտրոնացում

    Մգ2+ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն2+ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը2+ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար2+ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

    A-4 Կռման ջերմաստիճան

    An Խտացման բարձր ջերմաստիճանը ազդում է այբբենարանի և կաղապարի կապման վրա: - Կրճատել կռացման ջերմաստիճանը և օպտիմալացնել վիճակը 2 ° C գրադիենտով:

    A-5 Երկարացման ժամանակ

    Extension Կարճաժամկետ երկարացում —— Բարձրացրեք երկարացման ժամանակը:

    Հարց. Կեղծ դրական

    Երեւույթներ. Բացասական նմուշները ցույց են տալիս նաեւ թիրախային հաջորդականության գոտիները:

    A-1 PCR- ի աղտոտում

    Target Թիրախային հաջորդականության կամ ուժեղացման արտադրանքի խաչաձև աղտոտում. Ռեակտիվները կամ սարքավորումները պետք է ավտոկլավավորվեն `գոյություն ունեցող նուկլեինաթթուները վերացնելու համար, իսկ վարակման առկայությունը պետք է որոշվի բացասական հսկողության փորձերի միջոցով:

    ■ Ռեագենտով վարակվածություն.

    A-2 Primer

    Մգ2+ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն2+ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը2+ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար2+ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

    Prim Այբբենարանի ոչ պատշաճ ձևավորում, և թիրախային հաջորդականությունն ունի հոմոլոգիա ոչ նպատակային հաջորդականության հետ: —— Նախաստեղծ այբբենարաններ:

    Հ. Ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացում

    Ֆենոմեններ. PCR ուժեղացման գոտիները անհամապատասխան են սպասվող չափին ՝ մեծ կամ փոքր, երբեմն էլ լինում են ինչպես հատուկ ուժեղացման գոտիներ, այնպես էլ ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացման գոտիներ:

    A-1 այբբենարան

    Prim Այբբենարանի վատ յուրահատկություն

    —— Նոր դիզայնի այբբենարան:

    ■ Նախաներկի կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է. —Roիշտ բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել դենատուրացիայի ժամանակը:

    A-2 մգ2+ համակենտրոնացում

    The Mg2+ կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg2+ կոնցենտրացիան2+ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար2+ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

    A-3 rmերմակայուն պոլիմերազա

    En Չափից մեծ ֆերմենտի քանակ - —Պակասեցրեք ֆերմենտի քանակը համապատասխանաբար 0.5 U ընդմիջումներով:

    A-4 Կռման ջերմաստիճան

    An Կռման ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է .— increaseիշտ բարձրացնել կռացման ջերմաստիճանը կամ ընդունել երկաստիճան հովացման մեթոդը

    A-5 PCR ցիկլեր

    PC Չափից շատ PCR ցիկլեր —— Կրճատեք PCR ցիկլերի քանակը:

    Հարց. Կպչուն կամ քսելու խմբեր

    A-1 այբբենարան—————————––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––————————————————————————————————————————————————————————————————— -րագրի վերափոխում, փոխում այբբենարանի դիրքն ու երկարությունը ՝ դրա յուրահատկությունը բարձրացնելու համար. կամ կատարել ներկառուցված PCR:

    A-2 Կաղապար ԴՆԹ

    —— Կաղապարը մաքուր չէ —— Մաքրեք կաղապարը կամ հանեք ԴՆԹ – ն մաքրման հավաքածուներով:

    A-3 մգ2+ համակենտրոնացում

    —— Մգ2+ համակենտրոնացումը չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg– ն2+ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը2+ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար2+ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

    A-4 dNTP

    —— dNTP– ների կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— համապատասխանաբար նվազեցնել dNTP– ի կոնցենտրացիան

    A-5 Կռման ջերմաստիճան

    —— Շատ ցածր հալման ջերմաստիճան —— increaseիշտ բարձրացնել հալման ջերմաստիճանը

    A-6 ցիկլեր

    —— Չափից շատ ցիկլեր —— Օպտիմալացրեք ցիկլի համարը

    Հարց. Որքա՞ն կաղապարային ԴՆԹ պետք է ավելացվի 50 μl PCR ռեակցիայի համակարգում:
    ytry
    Հ. Ինչպե՞ս երկարացնել բեկորները:

    Առաջին քայլը համապատասխան պոլիմերազի ընտրությունն է: Սովորական Taq պոլիմերազան չի կարող սրբագրել 3'-5 'էզոնուկլազի ակտիվության բացակայության պատճառով, և անհամապատասխանությունը մեծապես կնվազեցնի բեկորների երկարացման արդյունավետությունը: Հետևաբար, սովորական Taq պոլիմերազը չի կարող արդյունավետորեն ուժեղացնել 5 կբ -ից ավելի թիրախային բեկորները: Հատուկ փոփոխությամբ կամ բարձր հավատարմությամբ պոլիմերազով Taq պոլիմերազը պետք է ընտրվի երկարացման արդյունավետությունը բարձրացնելու և բեկորների երկարատև ուժեղացման կարիքները բավարարելու համար: Բացի այդ, երկար բեկորների ուժեղացումը պահանջում է նաև այբբենարանի դիզայնի համապատասխան ճշգրտում, դենատուրացիայի ժամանակ, երկարացման ժամանակ, բուֆերային pH և այլն: Կաղապարի վնասը կանխելու համար 94 ° C- ում դենատուրացիայի ժամանակը պետք է կրճատվի մինչև 30 վրկ կամ ավելի մեկ ցիկլով, իսկ ջերմաստիճանը մինչև 94 ° C բարձրացնելուց առաջ ՝ 1 րոպեից պակաս: Ավելին, երկարացման ջերմաստիճանը մոտ 68 ° C- ով սահմանելը և երկարացման ժամանակը նախագծելը `1 կբ/րոպե արագության համաձայն, կարող են ապահովել երկար բեկորների արդյունավետ ուժեղացում:

    Հ. Ինչպե՞ս բարելավել PCR- ի ուժեղացման հավատարմությունը:

    PCR- ի ուժեղացման սխալի մակարդակը կարող է նվազեցվել ՝ օգտագործելով բարձր հավատարմությամբ տարբեր ԴՆԹ պոլիմերազներ: Մինչ այժմ հայտնաբերված Taq ԴՆԹ -ի պոլիմերազներից Pfu ֆերմենտն ունի ամենացածր սխալի տոկոսադրույքը և ամենաբարձր հավատարմությունը (տես կցված աղյուսակը): Ֆերմենտի ընտրությունից բացի, հետազոտողները կարող են հետագայում նվազեցնել PCR մուտացիայի արագությունը `օպտիմալացնելով ռեակցիայի պայմանները, ներառյալ բուֆերային կազմի օպտիմալացումը, ջերմակայուն պոլիմերազի կոնցենտրացիան և PCR ցիկլի օպտիմալացումը:

    Գրեք ձեր հաղորդագրությունը այստեղ և ուղարկեք մեզ