Արյան ուղղակի PCR հավաքածու

Թիրախային գենի արագ ուժեղացում ՝ ուղղակիորեն որպես շաբլոն օգտագործելով արյուն ՝ առանց արդյունահանման:

Այս հավաքածուն ընդունում է գենետիկորեն մշակված հակաբեղմնավորիչ ԴՆԹ պոլիմերազա `արդյունավետորեն ուժեղացնելու մարդու գենոմի մեկ կրկնօրինակի գեները: Այս հավաքածուի լավ օպտիմիզացված բուֆերային համակարգը օգնում է պոլիմերազին ուժեղ դիմակայել PCR ինհիբիտորների արգելակմանը, ուստի կարող է ուղղակիորեն ուժեղացնել ԴՆԹ -ն ՝ օգտագործելով արյունը և մշակված բջիջները ՝ որպես կաղապարներ: Այս ապրանքը հեշտ է գործել և չի պահանջում բարդ քայլեր, ինչպիսիք են ԴՆԹ -ի մաքրումը կամ նմուշի նախնական բուժումը:
Այս հավաքածուն տրամադրվում է որպես 2 × MasterMix, և արձագանքը կարող է կատարվել ՝ պարզապես ավելացնելով արյան ձևանմուշը և համապատասխան հայտնաբերման պրիմերները: Այն կարող է կիրառվել կաթնասունների մշակված բջիջների վրա, ինչպիսիք են մարդիկ, մկները, խոզերը, խոշոր եղջերավոր անասունները և այլ տեսակներ, ինչպես նաև թարմ կամ 4 ℃ կրիոպրոզերված ամբողջական արյուն, հակակոագուլանտ (EDTA, ցիտրատ, հեպարին), հեղուկացված արյան հյուսվածքներ և արյան չոր բծեր: պահվում է Whatman 903 և FTA Elute առևտրային քարտերի վրա:

Կատու Ոչ	Փաթեթավորման չափը
4992529	20 μl × 100 rxn
4992530	20 μl × 500 rxn

Ուղարկեք մեզ էլ

Ապրանքի մանրամասն

Փորձարարական օրինակ

ՀՏՀ

Ապրանքի պիտակներ

Հատկություններ

■ Պարզ և արագ. PCR- ի ուժեղացումը կարող է ուղղակիորեն իրականացվել ՝ օգտագործելով արյունը որպես ձևանմուշ, առանց նմուշի պատրաստման և ԴՆԹ -ի արդյունահանման ձանձրալի քայլերի անհրաժեշտության:
■ Բարձր մաքրություն. Նմուշի նախնական բուժման և ԴՆԹ արդյունահանման քայլերի բաց թողնելը կարող է օգնել խուսափել նմուշների խաչաձև աղտոտումից:
■ Բարձր թողունակություն. Լայնածավալ նմուշների համար PCR- ի նույնականացումը կարող է իրականացվել ՝ հավաքածուն համադրելով 96/384 հորանի PCR թիթեղների հետ:
■ Ուժեղ ունիվերսալություն. Այս հավաքածուն կարող է արդյունավետ կերպով ուժեղացնել բարձր GC բեկորները կամ բարդ երկրորդական կառուցվածքով բեկորները, իսկ ուժեղացման երկարությունը կարող է լինել մինչև 5 կբ:
Stress Սթրեսի ուժեղ դիմադրություն. Այս հավաքածուն կարող է կիրառվել տարբեր տեսակների և տարբեր ձևերով պահպանված արյան նմուշների համար:

Րագրեր

Այս հավաքածուի PCR արտադրանքը 3′ ծայրում պարունակում է «A», որը կարող է ուղղակիորեն օգտագործվել TA վեկտորների կլոնավորման համար: Այս հավաքածուն կարող է օգտագործվել գենոմային ԴՆԹ-ի բեկորների ուժեղացման, բարձր թողունակության գենետիկական վերլուծության և գենոտիպավորման (օրինակ `գենի հայտնաբերման) վերլուծության համար:

Բոլոր ապրանքները կարող են հարմարեցվել ODM/OEM- ի համար: Մանրամասների համար ՝սեղմեք Անհատականացված ծառայություն (ODM/OEM)

Նախորդ: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Հաջորդը: Mouse Tissue Direct PCR Kit

	Մարդու EDTA հակակոագուլյացիան օգտագործելով որպես կաղապար, GC- ի տարբեր պարունակությամբ 4 գեն ուժեղացվել է Blood Direct PCR Kit- ով: ՊՇՌ ռեակցիայի համակարգը 20 մկլ էր, իսկ որպես շաբլոն օգտագործվում էր 1 մկլ արյուն: M: TIANGEN Մարկեր II; 1 ՝ բեկորի չափը ՝ 1090 bp, GC պարունակությունը ՝ 68.1%; 2: Բեկորի չափը 1915 bp, GC պարունակությունը 70.4%; 3: Բեկորի չափը 448 bp, GC պարունակությունը 74.8%; 4: Բեկորի չափը 1527 bp, GC պարունակությունը 61.5%: Փորձնական արդյունքներ. Blood Direct PCR Kit- ը կարող է արդյունավետորեն ուժեղացնել ԴՆԹ-ի բեկորները GC պարունակությամբ 61.5%-74.8%միջակայքում, ինչը ենթադրում է, որ այն ի վիճակի է ուժեղացնել բարձր GC բեկորները:
	Մարդու EDTA հակակոագուլյացիան օգտագործելով որպես կաղապար, տարբեր երկարություններ ունեցող 5 գեն (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 և Hn4.0) ուժեղացվել են Blood Direct PCR Kit- ով: ՊՇՌ ռեակցիայի համակարգը 20 մկլ էր, իսկ որպես շաբլոն օգտագործվում էր 1 մկլ արյուն: M: TIANGEN Մարկեր II; 1-3: 3 տարբեր արյան նմուշներ; NTC: վերահսկողություն առանց այբբենարանների: Փորձնական արդյունքներ. Blood Direct PCR Kit- ը կարող է ընդլայնել բեկորները մինչև 4 կբ երկարությամբ, ինչը ենթադրում է, որ այն ընդունակ է ուժեղացնել երկար բեկորները:
	Մարդկային EDTA հակակոագուլյացիան օգտագործելով որպես ձևանմուշ, Blood Direct PCR Kit- ը օգտագործվել է արյան տարբեր նմուշների PCR հայտնաբերման համար: ՊՇՌ ռեակցիայի համակարգը 20 մկլ էր, իսկ որպես շաբլոն օգտագործվում էր 1 մկլ արյուն: M: TIANGEN Մարկեր II; 1-9. Արյան բեռնման քանակը `համապատասխանաբար 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl և 5 μl; NTC: վերահսկողություն առանց ձևանմուշի Փորձնական արդյունքներ. Blood Direct PCR Kit- ն ունի արյան նկատմամբ ուժեղ դիմադրություն և կարող է ուժեղացնել արյան նմուշները `0.1-5 մկլ բեռնվածությամբ:
	Մարդու, առնետի, հավի և տարբեր տեսակների արյան նմուշներ ՝ տարբեր բուժումներով, օգտագործվել են որպես կաղապարներ: Blood Direct PCR Kit- ն օգտագործվել է PRNP- ի (մարդ, 750 bp), Actin (առնետ, 200 bp) և β-Actin (Chicken, 1.0 kb) ուժեղացնելու համար: ՊՇՌ ռեակցիայի համակարգը 20 մկլ էր, իսկ որպես շաբլոն օգտագործվում էր 1 մկլ արյուն: M: TIANGEN Մարկեր II: Փորձնական արդյունքներ. Blood Direct PCR Kit- ը կարող է կիրառվել նմուշների լայն տեսականիով, իսկ PCR- ի ուղղակի հայտնաբերումը կարող է իրականացվել տարբեր տեսակների արյան նմուշների վրա `տարբեր բուժումներով:

Q: Չկա ուժեղացման գոտիներ

A-1 կաղապար

■ Կաղապարը պարունակում է սպիտակուցային խառնուրդներ կամ Taq ինհիբիտորներ և այլն: —— Մաքրել ԴՆԹ ձևանմուշը, հեռացնել սպիտակուցային կեղտերը կամ հանել մաքրման հավաքածուներով ԴՆԹ ձևանմուշը:

Temp Կաղապարի հետադարձումը լիարժեք չէ. —Համապատասխանաբար բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել Denaturation time- ը:

■ Կաղապարի դեգրադացիա —— Կրկին պատրաստեք կաղապարը:

A-2 այբբենարան

Prim Նախնական այբբենարանների վատ որակը.

■ Այբբենարանի քայքայումը —— բարձր կոնցենտրացիայի հիմքերը փոքր ծավալի բաժանեք պահպանման համար: Խուսափեք բազմակի սառեցումից և հալվելուց կամ երկարաժամկետ 4 ° C ջերմաստիճանի սառեցման պահպանումից:

Prim այբբենարանների ոչ պատշաճ ձևավորում (օր. Այբբենարանի երկարությունը բավարար չէ, հիմքը ձևավորվում է այբբենարանների միջև և այլն)

A-3 մգ²⁺համակենտրոնացում

Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն²⁺համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-4 Կռման ջերմաստիճան

An Խտացման բարձր ջերմաստիճանը ազդում է այբբենարանի և կաղապարի կապման վրա: - Կրճատել կռացման ջերմաստիճանը և օպտիմալացնել վիճակը 2 ° C գրադիենտով:

A-5 Երկարացման ժամանակ

Extension Կարճաժամկետ երկարացում —— Բարձրացրեք երկարացման ժամանակը:

Հարց. Կեղծ դրական

Երեւույթներ. Բացասական նմուշները ցույց են տալիս նաեւ թիրախային հաջորդականության գոտիները:

A-1 PCR- ի աղտոտում

Target Թիրախային հաջորդականության կամ ուժեղացման արտադրանքի խաչաձև աղտոտում. Ռեակտիվները կամ սարքավորումները պետք է ավտոկլավավորվեն `գոյություն ունեցող նուկլեինաթթուները վերացնելու համար, իսկ վարակման առկայությունը պետք է որոշվի բացասական հսկողության փորձերի միջոցով:

■ Ռեագենտով վարակվածություն.

A-2 Primer

Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն²⁺ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

Prim Այբբենարանի ոչ պատշաճ ձևավորում, և թիրախային հաջորդականությունն ունի հոմոլոգիա ոչ նպատակային հաջորդականության հետ: —— Նախաստեղծ այբբենարաններ:

Հ. Ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացում

Ֆենոմեններ. PCR ուժեղացման գոտիները անհամապատասխան են սպասվող չափին ՝ մեծ կամ փոքր, երբեմն էլ լինում են ինչպես հատուկ ուժեղացման գոտիներ, այնպես էլ ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացման գոտիներ:

A-1 այբբենարան

Prim Այբբենարանի վատ յուրահատկություն

—— Նոր դիզայնի այբբենարան:

■ Նախաներկի կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է. —Roիշտ բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել դենատուրացիայի ժամանակը:

A-2 մգ²⁺ համակենտրոնացում

The Mg²⁺ կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg2+ կոնցենտրացիան²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-3 rmերմակայուն պոլիմերազա

En Չափից մեծ ֆերմենտի քանակ - —Պակասեցրեք ֆերմենտի քանակը համապատասխանաբար 0.5 U ընդմիջումներով:

A-4 Կռման ջերմաստիճան

An Կռման ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է .— increaseիշտ բարձրացնել կռացման ջերմաստիճանը կամ ընդունել երկաստիճան հովացման մեթոդը

A-5 PCR ցիկլեր

PC Չափից շատ PCR ցիկլեր —— Կրճատեք PCR ցիկլերի քանակը:

Հարց. Կպչուն կամ քսելու խմբեր

A-1 այբբենարան—————————––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––————————————————————————————————————————————————————————————————— -րագրի վերափոխում, փոխում այբբենարանի դիրքն ու երկարությունը ՝ դրա յուրահատկությունը բարձրացնելու համար. կամ կատարել ներկառուցված PCR:

A-2 Կաղապար ԴՆԹ

—— Կաղապարը մաքուր չէ —— Մաքրեք կաղապարը կամ հանեք ԴՆԹ – ն մաքրման հավաքածուներով:

A-3 մգ²⁺ համակենտրոնացում

—— Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg– ն²⁺ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-4 dNTP

—— dNTP– ների կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— համապատասխանաբար նվազեցնել dNTP– ի կոնցենտրացիան

A-5 Կռման ջերմաստիճան

—— Շատ ցածր հալման ջերմաստիճան —— increaseիշտ բարձրացնել հալման ջերմաստիճանը

A-6 ցիկլեր

—— Չափից շատ ցիկլեր —— Օպտիմալացրեք ցիկլի համարը

Հարց. Որքա՞ն կաղապարային ԴՆԹ պետք է ավելացվի 50 μl PCR ռեակցիայի համակարգում:

Հ. Ինչպե՞ս երկարացնել բեկորները:

Առաջին քայլը համապատասխան պոլիմերազի ընտրությունն է: Սովորական Taq պոլիմերազան չի կարող սրբագրել 3'-5 'էզոնուկլազի ակտիվության բացակայության պատճառով, և անհամապատասխանությունը մեծապես կնվազեցնի բեկորների երկարացման արդյունավետությունը: Հետևաբար, սովորական Taq պոլիմերազը չի կարող արդյունավետորեն ուժեղացնել 5 կբ -ից ավելի թիրախային բեկորները: Հատուկ փոփոխությամբ կամ բարձր հավատարմությամբ պոլիմերազով Taq պոլիմերազը պետք է ընտրվի երկարացման արդյունավետությունը բարձրացնելու և բեկորների երկարատև ուժեղացման կարիքները բավարարելու համար: Բացի այդ, երկար բեկորների ուժեղացումը պահանջում է նաև այբբենարանի դիզայնի համապատասխան ճշգրտում, դենատուրացիայի ժամանակ, երկարացման ժամանակ, բուֆերային pH և այլն: Կաղապարի վնասը կանխելու համար 94 ° C- ում դենատուրացիայի ժամանակը պետք է կրճատվի մինչև 30 վրկ կամ ավելի մեկ ցիկլով, իսկ ջերմաստիճանը մինչև 94 ° C բարձրացնելուց առաջ ՝ 1 րոպեից պակաս: Ավելին, երկարացման ջերմաստիճանը մոտ 68 ° C- ով սահմանելը և երկարացման ժամանակը նախագծելը `1 կբ/րոպե արագության համաձայն, կարող են ապահովել երկար բեկորների արդյունավետ ուժեղացում:

Հ. Ինչպե՞ս բարելավել PCR- ի ուժեղացման հավատարմությունը:

PCR- ի ուժեղացման սխալի մակարդակը կարող է նվազեցվել ՝ օգտագործելով բարձր հավատարմությամբ տարբեր ԴՆԹ պոլիմերազներ: Մինչ այժմ հայտնաբերված Taq ԴՆԹ -ի պոլիմերազներից Pfu ֆերմենտն ունի ամենացածր սխալի տոկոսադրույքը և ամենաբարձր հավատարմությունը (տես կցված աղյուսակը): Ֆերմենտի ընտրությունից բացի, հետազոտողները կարող են հետագայում նվազեցնել PCR մուտացիայի արագությունը `օպտիմալացնելով ռեակցիայի պայմանները, ներառյալ բուֆերային կազմի օպտիմալացումը, ջերմակայուն պոլիմերազի կոնցենտրացիան և PCR ցիկլի օպտիմալացումը:

Գրեք ձեր հաղորդագրությունը այստեղ և ուղարկեք մեզ

Ապրանքների կատեգորիաներ

ԻՆՉՈ ԸՆՏՐԵԼ ՄԵ

Ստեղծման օրվանից մեր գործարանը մշակում է առաջին համաշխարհային կարգի արտադրանք ՝ պահպանելով սկզբունքը
որակի առաջին հերթին: Մեր արտադրանքը ձեռք է բերել գերազանց հեղինակություն արդյունաբերության մեջ և արժեքավոր վստահություն նոր և հին հաճախորդների շրջանում:

ՀԱՐQՈՄ