2 × Pfu PCR Mix

Չափազանց մաքուր բարձր հավատարմությամբ Taq ԴՆԹ պոլիմերազա:

Pfu DNA Polymerase- ը E.coli- ից արտահայտված է Pyrococus Furiosis DNA Polymerase գենով և մաքրվում և տարանջատվում բազմակի սյունակի զտմամբ: Քանի որ Pfu- ն ունի 3′-5 ′ էկզոնուկլազի ակտիվություն, այն կարող է սրբագրել ԴՆԹ-ի ուժեղացման գործընթացում, մինչդեռ ավանդական Taq ԴՆԹ պոլիմերազը չի կարող: Թեև Taq DNA- ի այլ պոլիմերազներ, ինչպիսիք են Vent, Deep Vent, Tli, UITma և այլն, ունեն սրբագրման գործառույթներ, Pfu- ն ունի ամենացածր անհամապատասխանության մակարդակը մինչ այժմ հայտնաբերված Taq ԴՆԹ պոլիմերազների միջև: Pfu DNA Polymerase- ն ավելի լավ ջերմային կայունություն ունի, քան սովորական Taq DNA պոլիմերազը, և այն կարող է պահպանել ավելի քան 90% ակտիվություն 95 ° C ջերմաստիճանում 1 ժամվա ընթացքում:

Մեկ խողովակ Pfu PCR Mix (Ազգային բարձր տեխնոլոգիական արտադրանքի սերտիֆիկացում)

P Pfu PCR Mix- ը բարելավել է PCR արձագանքի յուրահատկությունն ու զգայունությունը և կարող է ուժեղացնել GC- ի բարձր պարունակությամբ, երկրորդային կառուցվածքով և նման այլ բարդ կաղապարներ: Թիրախային ձևանմուշի ընդամենը 2 օրինակ կարող է ուժեղացվել ՝ ապահովելով ավելի ճշգրիտ փորձնական արդյունքներ:

P Pfu MasterMix յուրահատուկ բանաձևը շատ կայուն է դարձնում ռեակցիայի ամբողջ համակարգը, և գործունեության վրա չի ազդի կրկնակի սառեցման-հալեցման կամ երկարաժամկետ պահեստավորումը 4 ° C ջերմաստիճանում:

Pre Նախապես պատրաստված PCR խառնուրդի կայուն և արդյունավետ լուծումը կարող է արագ և պարզ դարձնել գործողությունը `զգալիորեն նվազեցնելով աշխատանքի ինտենսիվությունը և ընտրանքի սխալը: Բարձր արդյունավետության PCR ուժեղացուցիչն ու օպտիմալացնողը նույնպես ներառված են խառնուրդի մեջ, ինչը նվազեցնում է PCR- ի պայմանների պահանջները:

Product Այս ապրանքը ունի և՛ ներկ պարունակող, և՛ առանց ներկերի համակարգեր: Ներկանյութեր պարունակող PCR Mix արտադրանքները կարող են ուղղակիորեն էլեկտրոֆորեզվել PCR- ից հետո ՝ առանց բուֆերային նմուշի ավելացման:

Կատու Ոչ	Փաթեթավորման չափը
4992780	1 մլ
4992781	5*1 մլ
4992782	1 մլ
4992906	5*1 մլ

Ուղարկեք մեզ էլ

Ապրանքի մանրամասն

Աշխատանքային հոսք

ՀՏՀ

Ապրանքի պիտակներ

Գործունեության սահմանում

1 միավոր (U) Pfu ԴՆԹ պոլիմերազայի գործունեությունը սահմանվում է որպես ֆերմենտի քանակ, որը պահանջվում է 10 նմոլ դեօքսինուկլեոտիդներ թթվային չլուծվող նյութերի մեջ ներառել 74 ° C ջերմաստիճանում 30 րոպեի ընթացքում ՝ օգտագործելով սաղմոնի սերմնահեղուկի ակտիվացված ԴՆԹ-ն որպես կաղապար/նախաներկ:

Որակի հսկողություն

SDS-PAGE- ի հայտնաբերմամբ մաքրությունը կազմում է ավելի քան 99%; Էկզոգեն նուկլեզի ակտիվություն չի հայտնաբերվում. Մարդու գենոմի մեկ կրկնօրինակի գենը կարող է արդյունավետ ուժեղացվել. Մեկ շաբաթվա ընթացքում սենյակային ջերմաստիճանում պահվելիս էական ակտիվություն չի փոխվում:

Հիմնական տեխնիկական պարամետրեր

Այն ունի 3′-5 ′ էկզոնուկլազի և 5′-3 ′ էկզոնուկլազի ակտիվություն: ԴՆԹ-ի ուժեղացման երկարացման արագությունն ավելի ցածր է, քան Taq պոլիմերազայինը, և ընդհանրապես Pfu ֆերմենտի երկարացման արագությունը կազմում է 0.5-1 կբ / րոպե: Pfu- ի ջերմային կայունությունն ավելի լավ է, քան Taq- ը: GC- ի բարձր պարունակությամբ կաղապարների համար, դենատուրացիայի ջերմաստիճանը կարող է բարձրացվել մինչև 98 ° C, ինչը ոչ մի ազդեցություն չի ունենում Pfu պոլիմերազայի գործունեության վրա: ՊՇՌ արտադրանքը բութ ծայրով է, որը կարող է ավելացվել 3'-dA գերլարվածքով `նախքան TA վեկտորով կապելը կամ կլոնավորված բութ վեկտորով կլոնավորվելը:

Րագրեր

Այն կարող է օգտագործվել ԴՆԹ-ի բարձր հավատարմության ուժեղացման համար, ինչպիսիք են գենի արտահայտման կլոնավորումը, տեղակայված մուտացիան, մեկ նուկլեոտիդային պոլիմորֆիզմի (SNP) վերլուծությունը և վերջնական վերանորոգումը:

Բոլոր ապրանքները կարող են հարմարեցվել ODM/OEM- ի համար: Մանրամասների համար ՝սեղմեք Անհատականացված ծառայություն (ODM/OEM)

Նախորդ: Արագ կայքի ուղղորդված մուտագենեզի հավաքածու

Հաջորդը: Ultra HiFidelity PCR հավաքածու

Օգտագործեք գենոմային ԴՆԹ -ն որպես կաղապար `1 կբ հատվածը մեծացնելու համար:
PCR արձագանքից հետո վերցրեք 5 μl էլեկտրոֆորեզի հայտնաբերման համար:

Q: Չկա ուժեղացման գոտիներ

A-1 կաղապար

■ Կաղապարը պարունակում է սպիտակուցային խառնուրդներ կամ Taq ինհիբիտորներ և այլն: —— Մաքրել ԴՆԹ ձևանմուշը, հեռացնել սպիտակուցային կեղտերը կամ հանել մաքրման հավաքածուներով ԴՆԹ ձևանմուշը:

Temp Կաղապարի հետադարձումը լիարժեք չէ. —Համապատասխանաբար բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել Denaturation time- ը:

■ Կաղապարի դեգրադացիա —— Կրկին պատրաստեք կաղապարը:

A-2 այբբենարան

Prim Նախնական այբբենարանների վատ որակը.

■ Այբբենարանի քայքայումը —— բարձր կոնցենտրացիայի հիմքերը փոքր ծավալի բաժանեք պահպանման համար: Խուսափեք բազմակի սառեցումից և հալվելուց կամ երկարաժամկետ 4 ° C ջերմաստիճանի սառեցման պահպանումից:

Prim այբբենարանների ոչ պատշաճ ձևավորում (օր. Այբբենարանի երկարությունը բավարար չէ, հիմքը ձևավորվում է այբբենարանների միջև և այլն)

A-3 մգ²⁺համակենտրոնացում

Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն²⁺համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-4 Կռման ջերմաստիճան

An Խտացման բարձր ջերմաստիճանը ազդում է այբբենարանի և կաղապարի կապման վրա: - Կրճատել կռացման ջերմաստիճանը և օպտիմալացնել վիճակը 2 ° C գրադիենտով:

A-5 Երկարացման ժամանակ

Extension Կարճաժամկետ երկարացում —— Բարձրացրեք երկարացման ժամանակը:

Հարց. Կեղծ դրական

Երեւույթներ. Բացասական նմուշները ցույց են տալիս նաեւ թիրախային հաջորդականության գոտիները:

A-1 PCR- ի աղտոտում

Target Թիրախային հաջորդականության կամ ուժեղացման արտադրանքի խաչաձև աղտոտում. Ռեակտիվները կամ սարքավորումները պետք է ավտոկլավավորվեն `գոյություն ունեցող նուկլեինաթթուները վերացնելու համար, իսկ վարակման առկայությունը պետք է որոշվի բացասական հսկողության փորձերի միջոցով:

■ Ռեագենտով վարակվածություն.

A-2 Primer

Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն²⁺ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

Prim Այբբենարանի ոչ պատշաճ ձևավորում, և թիրախային հաջորդականությունն ունի հոմոլոգիա ոչ նպատակային հաջորդականության հետ: —— Նախաստեղծ այբբենարաններ:

Հ. Ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացում

Ֆենոմեններ. PCR ուժեղացման գոտիները անհամապատասխան են սպասվող չափին ՝ մեծ կամ փոքր, երբեմն էլ լինում են ինչպես հատուկ ուժեղացման գոտիներ, այնպես էլ ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացման գոտիներ:

A-1 այբբենարան

Prim Այբբենարանի վատ յուրահատկություն

—— Նոր դիզայնի այբբենարան:

■ Նախաներկի կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է. —Roիշտ բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել դենատուրացիայի ժամանակը:

A-2 մգ²⁺ համակենտրոնացում

The Mg²⁺ կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg2+ կոնցենտրացիան²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-3 rmերմակայուն պոլիմերազա

En Չափից մեծ ֆերմենտի քանակ - —Պակասեցրեք ֆերմենտի քանակը համապատասխանաբար 0.5 U ընդմիջումներով:

A-4 Կռման ջերմաստիճան

An Կռման ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է .— increaseիշտ բարձրացնել կռացման ջերմաստիճանը կամ ընդունել երկաստիճան հովացման մեթոդը

A-5 PCR ցիկլեր

PC Չափից շատ PCR ցիկլեր —— Կրճատեք PCR ցիկլերի քանակը:

Հարց. Կպչուն կամ քսելու խմբեր

A-1 այբբենարան—————————––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––————————————————————————————————————————————————————————————————— -րագրի վերափոխում, փոխում այբբենարանի դիրքն ու երկարությունը ՝ դրա յուրահատկությունը բարձրացնելու համար. կամ կատարել ներկառուցված PCR:

A-2 Կաղապար ԴՆԹ

—— Կաղապարը մաքուր չէ —— Մաքրեք կաղապարը կամ հանեք ԴՆԹ – ն մաքրման հավաքածուներով:

A-3 մգ²⁺ համակենտրոնացում

—— Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg– ն²⁺ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-4 dNTP

—— dNTP– ների կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— համապատասխանաբար նվազեցնել dNTP– ի կոնցենտրացիան

A-5 Կռման ջերմաստիճան

—— Շատ ցածր հալման ջերմաստիճան —— increaseիշտ բարձրացնել հալման ջերմաստիճանը

A-6 ցիկլեր

—— Չափից շատ ցիկլեր —— Օպտիմալացրեք ցիկլի համարը

Հարց. Որքա՞ն կաղապարային ԴՆԹ պետք է ավելացվի 50 μl PCR ռեակցիայի համակարգում:

Հ. Ինչպե՞ս երկարացնել բեկորները:

Առաջին քայլը համապատասխան պոլիմերազի ընտրությունն է: Սովորական Taq պոլիմերազան չի կարող սրբագրել 3'-5 'էզոնուկլազի ակտիվության բացակայության պատճառով, և անհամապատասխանությունը մեծապես կնվազեցնի բեկորների երկարացման արդյունավետությունը: Հետևաբար, սովորական Taq պոլիմերազը չի կարող արդյունավետորեն ուժեղացնել 5 կբ -ից ավելի թիրախային բեկորները: Հատուկ փոփոխությամբ կամ բարձր հավատարմությամբ պոլիմերազով Taq պոլիմերազը պետք է ընտրվի երկարացման արդյունավետությունը բարձրացնելու և բեկորների երկարատև ուժեղացման կարիքները բավարարելու համար: Բացի այդ, երկար բեկորների ուժեղացումը պահանջում է նաև այբբենարանի դիզայնի համապատասխան ճշգրտում, դենատուրացիայի ժամանակ, երկարացման ժամանակ, բուֆերային pH և այլն: Կաղապարի վնասը կանխելու համար 94 ° C- ում դենատուրացիայի ժամանակը պետք է կրճատվի մինչև 30 վրկ կամ ավելի մեկ ցիկլով, իսկ ջերմաստիճանը մինչև 94 ° C բարձրացնելուց առաջ ՝ 1 րոպեից պակաս: Ավելին, երկարացման ջերմաստիճանը մոտ 68 ° C- ով սահմանելը և երկարացման ժամանակը նախագծելը `1 կբ/րոպե արագության համաձայն, կարող են ապահովել երկար բեկորների արդյունավետ ուժեղացում:

Հ. Ինչպե՞ս բարելավել PCR- ի ուժեղացման հավատարմությունը:

PCR- ի ուժեղացման սխալի մակարդակը կարող է նվազեցվել ՝ օգտագործելով բարձր հավատարմությամբ տարբեր ԴՆԹ պոլիմերազներ: Մինչ այժմ հայտնաբերված Taq ԴՆԹ -ի պոլիմերազներից Pfu ֆերմենտն ունի ամենացածր սխալի տոկոսադրույքը և ամենաբարձր հավատարմությունը (տես կցված աղյուսակը): Ֆերմենտի ընտրությունից բացի, հետազոտողները կարող են հետագայում նվազեցնել PCR մուտացիայի արագությունը `օպտիմալացնելով ռեակցիայի պայմանները, ներառյալ բուֆերային կազմի օպտիմալացումը, ջերմակայուն պոլիմերազի կոնցենտրացիան և PCR ցիկլի օպտիմալացումը:

Գրեք ձեր հաղորդագրությունը այստեղ և ուղարկեք մեզ

Ապրանքների կատեգորիաներ

ԻՆՉՈ ԸՆՏՐԵԼ ՄԵ

Ստեղծման օրվանից մեր գործարանը մշակում է առաջին համաշխարհային կարգի արտադրանք ՝ պահպանելով սկզբունքը
որակի առաջին հերթին: Մեր արտադրանքը ձեռք է բերել գերազանց հեղինակություն արդյունաբերության մեջ և արժեքավոր վստահություն նոր և հին հաճախորդների շրջանում:

ՀԱՐQՈՄ