2 × Taq Plus PCR Mix

Չափազանց մաքուր, բարձր արդյունավետություն և բարձր հավատարմություն Taq ԴՆԹ պոլիմերազա:

Taq Plus DNA Polymerase- ը Taq և Pfu ԴՆԹ պոլիմերազների խառնուրդ է: Այն ունի 5'-3 'էկզոնուկլազի ակտիվություն և 3'-5' էկզոնուկլազի ակտիվություն `ուժեղացման բարձր արդյունավետության և ցածր անհամապատասխանության արագության հատկանիշներով: Taq Plus DNA պոլիմերազի համեմատ Taq Plus DNA պոլիմերազն ունի ուժեղացման երկարության առավելություններ (պարզ կաղապարները կարող են արդյունավետ կերպով ուժեղացվել մինչև 20 կբ, իսկ բարդ կաղապարները ՝ մինչև 10 կբ), լավ հավատարմություն և այլն: Pfu ԴՆԹ պոլիմերազի համեմատ ունի արագ ուժեղացման արագության և ռեակցիայի բարձր արդյունավետության առավելությունները:

Կատու Ոչ	Փաթեթավորման չափը
4992791	1 մլ
4992792	5*1 մլ
4992793	5 × 1 մլ

Ուղարկեք մեզ էլ

Ապրանքի մանրամասն

Փորձարարական օրինակ

ՀՏՀ

Ապրանքի պիտակներ

Գործունեության սահմանում

1 միավոր (U) Taq Plus ԴՆԹ պոլիմերազի գործունեությունը սահմանվում է որպես ֆերմենտի քանակ, որը պահանջվում է 10 նմոլ դեօքսինուկլեոտիդներ թթվային չլուծվող նյութերի մեջ 74 ° C ջերմաստիճանում 30 րոպեի ընթացքում ակտիվացնելով սաղմոնի սերմնահեղուկի ակտիվացված ԴՆԹ-ն որպես կաղապար/նախաներկ:

Որակի հսկողություն

SDS-PAGE- ի հայտնաբերմամբ մաքրությունը կազմում է ավելի քան 99%; Էկզոգեն նուկլեզի ակտիվություն չի հայտնաբերվում. Մարդու գենոմի մեկ կրկնօրինակի գենը կարող է արդյունավետ ուժեղացվել. Մեկ շաբաթվա ընթացքում սենյակային ջերմաստիճանում պահվելիս էական ակտիվություն չի փոխվում:

Հիմնական տեխնիկական պարամետրեր

Taq Plus DNA Polymerase- ն ունի 5′-3 ′ էկզոնուկլազի և 3′-5 ′ էկզոնուկլազի ակտիվություն: PCR- ի արտադրանքը կարող է ուղղակիորեն կլոնավորվել TA վեկտորի մեջ: Եթե անհրաժեշտ է բարելավել կլոնավորման արդյունավետությունը, խորհուրդ է տրվում նախ մաքրել ՊՇՌ արտադրանքները և կատարել Ա-պոչ `TA վեկտորին կլոնավորվելուց առաջ:

Մեկ խողովակ Taq Plus PCR Mix (Ազգային բարձր տեխնոլոգիական արտադրանքի սերտիֆիկացում)

■ Taq Plus PCR Mix- ը բարելավել է PCR ռեակցիայի յուրահատկությունն ու զգայունությունը և կարող է ուժեղացնել GC- ի բարձր պարունակությամբ, երկրորդային կառուցվածքով և այլն նման բարդ կաղապարներ: Թիրախային ձևանմուշի ընդամենը 2 օրինակ կարող է ուժեղացվել ՝ ապահովելով ավելի ճշգրիտ փորձնական արդյունքներ:

T Taq Plus PCR Mix- ի յուրահատուկ բանաձևը շատ կայուն է դարձնում ռեակցիայի ամբողջ համակարգը, և գործունեության վրա չի ազդի կրկնակի սառեցման-հալեցման կամ 4 ° C ջերմաստիճանի երկարատև պահպանումը:

Pre Նախապես պատրաստված PCR խառնուրդի կայուն և արդյունավետ լուծումը կարող է արագ և պարզ դարձնել գործողությունը `զգալիորեն նվազեցնելով աշխատանքի ինտենսիվությունը և ընտրանքի սխալը: Բարձր արդյունավետության PCR ուժեղացուցիչն ու օպտիմալացնողը նույնպես ներառված են խառնուրդի մեջ, ինչը նվազեցնում է PCR- ի պայմանների պահանջները:

Product Այս ապրանքը ունի և՛ ներկ պարունակող, և՛ առանց ներկերի համակարգեր: Ներկանյութեր պարունակող PCR Mix արտադրանքները կարող են ուղղակիորեն էլեկտրոֆորեզվել PCR- ից հետո ՝ առանց բուֆերային նմուշի ավելացման:

Րագրեր

Այն սովորաբար օգտագործվում է բարձր հավատարմությամբ և բարդ կառուցվածքով կաղապարների ուժեղացման համար, ինչպիսիք են GC- ի բարձր պարունակությունը և երկրորդային կառուցվածքը: Շատ դեպքերում այն կարող է փոխարինել Taq DNA պոլիմերազային:

Բոլոր ապրանքները կարող են հարմարեցվել ODM/OEM- ի համար: Մանրամասների համար ՝սեղմեք Անհատականացված ծառայություն (ODM/OEM)

Նախորդ: 2 × Taq Platinum PCR Mix

Հաջորդը: 2 × GC հարուստ PCR Mix

Օգտագործեք գենոմային ԴՆԹ -ն որպես կաղապար `1 կբ հատված բարձրացնելու համար:
PCR արձագանքից հետո վերցրեք 5 μl էլեկտրոֆորեզի հայտնաբերման համար:

Q: Չկա ուժեղացման գոտիներ

A-1 կաղապար

■ Կաղապարը պարունակում է սպիտակուցային խառնուրդներ կամ Taq ինհիբիտորներ և այլն: —— Մաքրել ԴՆԹ ձևանմուշը, հեռացնել սպիտակուցային կեղտերը կամ հանել մաքրման հավաքածուներով ԴՆԹ ձևանմուշը:

Temp Կաղապարի հետադարձումը լիարժեք չէ. —Համապատասխանաբար բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել Denaturation time- ը:

■ Կաղապարի դեգրադացիա —— Կրկին պատրաստեք կաղապարը:

A-2 այբբենարան

Prim Նախնական այբբենարանների վատ որակը.

■ Այբբենարանի քայքայումը —— բարձր կոնցենտրացիայի հիմքերը փոքր ծավալի բաժանեք պահպանման համար: Խուսափեք բազմակի սառեցումից և հալվելուց կամ երկարաժամկետ 4 ° C ջերմաստիճանի սառեցման պահպանումից:

Prim այբբենարանների ոչ պատշաճ ձևավորում (օր. Այբբենարանի երկարությունը բավարար չէ, հիմքը ձևավորվում է այբբենարանների միջև և այլն)

A-3 մգ²⁺համակենտրոնացում

Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն²⁺համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-4 Կռման ջերմաստիճան

An Խտացման բարձր ջերմաստիճանը ազդում է այբբենարանի և կաղապարի կապման վրա: - Կրճատել կռացման ջերմաստիճանը և օպտիմալացնել վիճակը 2 ° C գրադիենտով:

A-5 Երկարացման ժամանակ

Extension Կարճաժամկետ երկարացում —— Բարձրացրեք երկարացման ժամանակը:

Հարց. Կեղծ դրական

Երեւույթներ. Բացասական նմուշները ցույց են տալիս նաեւ թիրախային հաջորդականության գոտիները:

A-1 PCR- ի աղտոտում

Target Թիրախային հաջորդականության կամ ուժեղացման արտադրանքի խաչաձև աղտոտում. Ռեակտիվները կամ սարքավորումները պետք է ավտոկլավավորվեն `գոյություն ունեցող նուկլեինաթթուները վերացնելու համար, իսկ վարակման առկայությունը պետք է որոշվի բացասական հսկողության փորձերի միջոցով:

■ Ռեագենտով վարակվածություն.

A-2 Primer

Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն²⁺ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

Prim Այբբենարանի ոչ պատշաճ ձևավորում, և թիրախային հաջորդականությունն ունի հոմոլոգիա ոչ նպատակային հաջորդականության հետ: —— Նախաստեղծ այբբենարաններ:

Հ. Ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացում

Ֆենոմեններ. PCR ուժեղացման գոտիները անհամապատասխան են սպասվող չափին ՝ մեծ կամ փոքր, երբեմն էլ լինում են ինչպես հատուկ ուժեղացման գոտիներ, այնպես էլ ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացման գոտիներ:

A-1 այբբենարան

Prim Այբբենարանի վատ յուրահատկություն

—— Նոր դիզայնի այբբենարան:

■ Նախաներկի կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է. —Roիշտ բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել դենատուրացիայի ժամանակը:

A-2 մգ²⁺ համակենտրոնացում

The Mg²⁺ կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg2+ կոնցենտրացիան²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-3 rmերմակայուն պոլիմերազա

En Չափից մեծ ֆերմենտի քանակ - —Պակասեցրեք ֆերմենտի քանակը համապատասխանաբար 0.5 U ընդմիջումներով:

A-4 Կռման ջերմաստիճան

An Կռման ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է .— increaseիշտ բարձրացնել կռացման ջերմաստիճանը կամ ընդունել երկաստիճան հովացման մեթոդը

A-5 PCR ցիկլեր

PC Չափից շատ PCR ցիկլեր —— Կրճատեք PCR ցիկլերի քանակը:

Հարց. Կպչուն կամ քսելու խմբեր

A-1 այբբենարան—————————––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––————————————————————————————————————————————————————————————————— -րագրի վերափոխում, փոխում այբբենարանի դիրքն ու երկարությունը ՝ դրա յուրահատկությունը բարձրացնելու համար. կամ կատարել ներկառուցված PCR:

A-2 Կաղապար ԴՆԹ

—— Կաղապարը մաքուր չէ —— Մաքրեք կաղապարը կամ հանեք ԴՆԹ – ն մաքրման հավաքածուներով:

A-3 մգ²⁺ համակենտրոնացում

—— Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg– ն²⁺ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-4 dNTP

—— dNTP– ների կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— համապատասխանաբար նվազեցնել dNTP– ի կոնցենտրացիան

A-5 Կռման ջերմաստիճան

—— Շատ ցածր հալման ջերմաստիճան —— increaseիշտ բարձրացնել հալման ջերմաստիճանը

A-6 ցիկլեր

—— Չափից շատ ցիկլեր —— Օպտիմալացրեք ցիկլի համարը

Հարց. Որքա՞ն կաղապարային ԴՆԹ պետք է ավելացվի 50 μl PCR ռեակցիայի համակարգում:

Հ. Ինչպե՞ս երկարացնել բեկորները:

Առաջին քայլը համապատասխան պոլիմերազի ընտրությունն է: Սովորական Taq պոլիմերազան չի կարող սրբագրել 3'-5 'էզոնուկլազի ակտիվության բացակայության պատճառով, և անհամապատասխանությունը մեծապես կնվազեցնի բեկորների երկարացման արդյունավետությունը: Հետևաբար, սովորական Taq պոլիմերազը չի կարող արդյունավետորեն ուժեղացնել 5 կբ -ից ավելի թիրախային բեկորները: Հատուկ փոփոխությամբ կամ բարձր հավատարմությամբ պոլիմերազով Taq պոլիմերազը պետք է ընտրվի երկարացման արդյունավետությունը բարձրացնելու և բեկորների երկարատև ուժեղացման կարիքները բավարարելու համար: Բացի այդ, երկար բեկորների ուժեղացումը պահանջում է նաև այբբենարանի դիզայնի համապատասխան ճշգրտում, դենատուրացիայի ժամանակ, երկարացման ժամանակ, բուֆերային pH և այլն: Կաղապարի վնասը կանխելու համար 94 ° C- ում դենատուրացիայի ժամանակը պետք է կրճատվի մինչև 30 վրկ կամ ավելի մեկ ցիկլով, իսկ ջերմաստիճանը մինչև 94 ° C բարձրացնելուց առաջ ՝ 1 րոպեից պակաս: Ավելին, երկարացման ջերմաստիճանը մոտ 68 ° C- ով սահմանելը և երկարացման ժամանակը նախագծելը `1 կբ/րոպե արագության համաձայն, կարող են ապահովել երկար բեկորների արդյունավետ ուժեղացում:

Հ. Ինչպե՞ս բարելավել PCR- ի ուժեղացման հավատարմությունը:

PCR- ի ուժեղացման սխալի մակարդակը կարող է նվազեցվել ՝ օգտագործելով բարձր հավատարմությամբ տարբեր ԴՆԹ պոլիմերազներ: Մինչ այժմ հայտնաբերված Taq ԴՆԹ -ի պոլիմերազներից Pfu ֆերմենտն ունի ամենացածր սխալի տոկոսադրույքը և ամենաբարձր հավատարմությունը (տես կցված աղյուսակը): Ֆերմենտի ընտրությունից բացի, հետազոտողները կարող են հետագայում նվազեցնել PCR մուտացիայի արագությունը `օպտիմալացնելով ռեակցիայի պայմանները, ներառյալ բուֆերային կազմի օպտիմալացումը, ջերմակայուն պոլիմերազի կոնցենտրացիան և PCR ցիկլի օպտիմալացումը:

Գրեք ձեր հաղորդագրությունը այստեղ և ուղարկեք մեզ

Ապրանքների կատեգորիաներ

ԻՆՉՈ ԸՆՏՐԵԼ ՄԵ

Ստեղծման օրվանից մեր գործարանը մշակում է առաջին համաշխարհային կարգի արտադրանք ՝ պահպանելով սկզբունքը
որակի առաջին հերթին: Մեր արտադրանքը ձեռք է բերել գերազանց հեղինակություն արդյունաբերության մեջ և արժեքավոր վստահություն նոր և հին հաճախորդների շրջանում:

ՀԱՐQՈՄ