2 × Taq Platinum PCR Mix

Ուլտրա-մաքուր HotStart բարձր հավատարմության ջերմակայուն ԴՆԹ պոլիմերազա:

Taq Platinum DNA Polymerase- ը քիմիապես ձևափոխված HotStart Taq պոլիմերազ է `3′-5 ′ էկզոնուկլազի ակտիվությամբ և 5′-3 ′ էկզոնուկլազի ակտիվությամբ: Taq Platinum DNA Polymerase- ի ֆերմենտային ակտիվությունը արգելափակված է սենյակային ջերմաստիճանում: Նրա գործունեությունը կարող է ակտիվացվել միայն 94 ° C- ում 5-10 րոպե տաքացնելուց հետո, դրանով իսկ խուսափելով ոչ հատուկ ուժեղացումից, որը առաջացել է այբբենարանների ոչ սպեցիֆիկ հալեցման կամ այբբենարանային դիմեր ցածր ջերմաստիճանում մինչև ՊՇՌ ռեակցիայի սկզբնական ցիկլը և մեծապես բարձրացնելով զգայունությունը: և PCR ռեակցիայի առանձնահատկությունը: Բացի այդ, Taq Platinum DNA Polymerase- ն ունի շատ բարձր հավատարմություն, ինչը երկրորդն է Pfu պոլիմերազից հետո: ԴՆԹ -ի պոլիմերացման արագացման արագությունը ավելի արագ է, քան Pfu պոլիմերազը, և ուժեղացման արդյունավետությունն ավելի բարձր է:

Կատու Ոչ	Փաթեթավորման չափը
4992789	5x1 մլ
4992790	5 × 1 մլ

Ուղարկեք մեզ էլ

Ապրանքի մանրամասն

Փորձարարական օրինակ

ՀՏՀ

Ապրանքի պիտակներ

Գործունեության սահմանում

1 միավոր (U) Taq պլատինե ԴՆԹ պոլիմերազի գործունեությունը սահմանվում է որպես ֆերմենտի քանակ, որը պահանջվում է 10 նմոլ դեօքսինուկլեոտիդներ թթվային չլուծվող նյութերի մեջ ներառել 74 ° C ջերմաստիճանում 30 րոպեի ընթացքում ՝ օգտագործելով սաղմոնի սերմնահեղուկի ակտիվացված ԴՆԹ-ն որպես կաղապար/նախաներկ:

Որակի հսկողություն

SDS-PAGE- ի հայտնաբերմամբ մաքրությունը կազմում է ավելի քան 99%; Էկզոգեն նուկլեզի ակտիվություն չի հայտնաբերվում. Մարդու գենոմի մեկ կրկնօրինակի գենը կարող է արդյունավետ ուժեղացվել. Մեկ շաբաթվա ընթացքում սենյակային ջերմաստիճանում պահվելիս էական ակտիվություն չի փոխվում:

Հիմնական տեխնիկական պարամետրեր

Այն ունի 5′-3 ′ էկզոնուկլազի և 3′-5 ′ էկզոնուկլազի ակտիվություն, և դրա հավատարմությունը գտնվում է Pfu պոլիմերազայի կողքին: Taq Platinum Polymerase- ի երկարացման արագությունն ավելի արագ է, քան Pfu պոլիմերազը, և ուժեղացման արդյունավետությունն ավելի բարձր է: PCR- ի արտադրանքը կարող է ուղղակիորեն կապվել բութ ծայրին կամ կլոնավորվել TA վեկտորով: Եթե անհրաժեշտ է բարելավել կլոնավորման արդյունավետությունը, խորհուրդ է տրվում նախ զտել և T'վեկտորին կլոնավորելուց առաջ ավելացնել 3'-dA գերհագեցում:

Մեկ խողովակ Taq Platinum MasterMix (Ազգային բարձր տեխնոլոգիական արտադրանքի սերտիֆիկացում)

■ Taq Platinum MasterMix- ը բարելավել է PCR ռեակցիայի առանձնահատկությունն ու զգայունությունը և կարող է ուժեղացնել GC- ի բարձր պարունակությամբ, երկրորդային կառուցվածքով և նմանատիպ բարդ կաղապարներ: Թիրախային ձևանմուշի ընդամենը 2 օրինակ կարող է ուժեղացվել ՝ ապահովելով ավելի ճշգրիտ փորձնական արդյունքներ:

T Taq Platinum MasterMix յուրահատուկ բանաձևը շատ կայուն է դարձնում ռեակցիայի ամբողջ համակարգը, և գործունեության վրա չի ազդի կրկնակի սառեցման-հալեցման կամ 4 ° C ջերմաստիճանի երկարատև պահպանումը:

■ Նախապես պատրաստված PCR- ի կայուն և արդյունավետ լուծումը կարող է արագ և պարզ դարձնել գործողությունը `զգալիորեն նվազեցնելով աշխատանքի ինտենսիվությունը և նմուշառման սխալը: Բարձր արդյունավետության PCR ուժեղացուցիչն ու օպտիմալացնողը նույնպես ներառված են խառնուրդի մեջ, ինչը նվազեցնում է PCR- ի պայմանների պահանջները:

Product Այս ապրանքը ունի և՛ ներկ պարունակող, և՛ առանց ներկերի համակարգեր: Ներկ պարունակող MasterMix արտադրանքները կարող են ուղղակիորեն էլեկտրոֆորեզվել PCR- ից հետո ՝ առանց բեռնման բուֆեր ավելացնելու:

Րագրեր

Այն կարող է փոխարինել Pfu պոլիմերազը `բարձր հավատարմության արտադրանքն ուժեղացնելու բարդ ձևանմուշներից, ինչպիսիք են գենոմները, և այն հարմար է այնպիսի ծրագրերի համար, ինչպիսիք են արտահայտման գեների կլոնավորումը, տեղանքի հատուկ մուտացիաները և մեկ նուկլեոտիդային պոլիմորֆիզմի (SNP) վերլուծությունը և այլն:

PCR այբբենարանների նախագծման նախազգուշական միջոցներ.

Այբբենարանի երկարությունը սովորաբար 20-25 մ է: Այնուամենայնիվ, երկար հատվածային PCR- ի կատարման ժամանակ այբբենարանի երկարությունը պետք է ավելացվի մինչև 30-35 մ:

Prim Երկու այբբենարանների միջև չկա լրացուցիչ զուգավորում, հատկապես 3 ′ վերջի վերջին 3 հիմքերի համար:

■ GC- ի պարունակությունը պետք է լինի 50-60%, և խուսափի տեղական հարուստ GC- ից կամ AT- ից: Նախաներկը և կաղապարը կայուն կապելու համար խուսափեք 3 ′ ծայրում AT հարուստ կառուցվածքից:

■ Խուսափեք այբբենարանից `երկրորդական կառուցվածք ձևավորելու համար:

■ Ընտրեք երկու այբբենարան Tm ջերմաստիճանով միմյանց մոտ:

PCR- ի համար այբբենարանների Tm արժեքի հաշվարկ.

■ Երբ այբբենարանը 20 մ -ից պակաս է `Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C):

■ Երբ այբբենարանը ավելի քան 20 mer է `Tm = 81.5+0.41 (GC%)-600/L, որտեղ L- ը այբբենարանի երկարությունն է:

■ Կարգավորման ջերմաստիճանը սահմանեք (Tm-5) ° C:

PCR այբբենարան մուտքագրում

Նախաներկերի համապատասխան վերջնական կոնցենտրացիան կարող է ընտրվել 0.1 μM- ից 1.0 μM- ի միջև: Նախաներկի չափազանց ցածր կոնցենտրացիան հանգեցնում է ուժեղացման արտադրանքի ցածր եկամտաբերության, մինչդեռ այբբենարանի չափազանց բարձր կոնցենտրացիան ավելի հակված է ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացման: Սովորաբար, երբ կաղապարային ԴՆԹ -ի քանակը մեծ է կամ բարդ կաղապարային ԴՆԹ (օրինակ ՝ մարդու գենոմի ԴՆԹ) օգտագործվում է որպես կաղապար, այբբենարանի կոնցենտրացիան պետք է լինի ավելի ցածր: Երբ կաղապարային ԴՆԹ -ի քանակը փոքր է կամ պարզ կաղապարային ԴՆԹ -ն (օրինակ ՝ պլազմիդային ԴՆԹ և այլն) օգտագործվում է որպես կաղապար, այբբենարանի կոնցենտրացիան պետք է լինի ավելի բարձր:

Բոլոր ապրանքները կարող են հարմարեցվել ODM/OEM- ի համար: Մանրամասների համար ՝սեղմեք Անհատականացված ծառայություն (ODM/OEM)

Նախորդ: 2 × HotStart Taq PCR Mix

Հաջորդը: 2 × Taq Plus PCR Mix

Օգտագործեք գենոմային ԴՆԹ -ն որպես կաղապար `1 կբ բեկորն ուժեղացնելու համար: ՊՇՌ արձագանքից հետո վերցրեք 5 μl էլեկտրոֆորեզի հայտնաբերման համար:

Q: Չկա ուժեղացման գոտիներ

A-1 կաղապար

■ Կաղապարը պարունակում է սպիտակուցային խառնուրդներ կամ Taq ինհիբիտորներ և այլն: —— Մաքրել ԴՆԹ ձևանմուշը, հեռացնել սպիտակուցային կեղտերը կամ հանել մաքրման հավաքածուներով ԴՆԹ ձևանմուշը:

Temp Կաղապարի հետադարձումը լիարժեք չէ. —Համապատասխանաբար բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել Denaturation time- ը:

■ Կաղապարի դեգրադացիա —— Կրկին պատրաստեք կաղապարը:

A-2 այբբենարան

Prim Նախնական այբբենարանների վատ որակը.

■ Այբբենարանի քայքայումը —— բարձր կոնցենտրացիայի հիմքերը փոքր ծավալի բաժանեք պահպանման համար: Խուսափեք բազմակի սառեցումից և հալվելուց կամ երկարաժամկետ 4 ° C ջերմաստիճանի սառեցման պահպանումից:

Prim այբբենարանների ոչ պատշաճ ձևավորում (օր. Այբբենարանի երկարությունը բավարար չէ, հիմքը ձևավորվում է այբբենարանների միջև և այլն)

A-3 մգ²⁺համակենտրոնացում

Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն²⁺համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-4 Կռման ջերմաստիճան

An Խտացման բարձր ջերմաստիճանը ազդում է այբբենարանի և կաղապարի կապման վրա: - Կրճատել կռացման ջերմաստիճանը և օպտիմալացնել վիճակը 2 ° C գրադիենտով:

A-5 Երկարացման ժամանակ

Extension Կարճաժամկետ երկարացում —— Բարձրացրեք երկարացման ժամանակը:

Հարց. Կեղծ դրական

Երեւույթներ. Բացասական նմուշները ցույց են տալիս նաեւ թիրախային հաջորդականության գոտիները:

A-1 PCR- ի աղտոտում

Target Թիրախային հաջորդականության կամ ուժեղացման արտադրանքի խաչաձև աղտոտում. Ռեակտիվները կամ սարքավորումները պետք է ավտոկլավավորվեն `գոյություն ունեցող նուկլեինաթթուները վերացնելու համար, իսկ վարակման առկայությունը պետք է որոշվի բացասական հսկողության փորձերի միջոցով:

■ Ռեագենտով վարակվածություն.

A-2 Primer

Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց ցածր է —— increaseիշտ բարձրացնել Mg– ն²⁺ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

Prim Այբբենարանի ոչ պատշաճ ձևավորում, և թիրախային հաջորդականությունն ունի հոմոլոգիա ոչ նպատակային հաջորդականության հետ: —— Նախաստեղծ այբբենարաններ:

Հ. Ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացում

Ֆենոմեններ. PCR ուժեղացման գոտիները անհամապատասխան են սպասվող չափին ՝ մեծ կամ փոքր, երբեմն էլ լինում են ինչպես հատուկ ուժեղացման գոտիներ, այնպես էլ ոչ սպեցիֆիկ ուժեղացման գոտիներ:

A-1 այբբենարան

Prim Այբբենարանի վատ յուրահատկություն

—— Նոր դիզայնի այբբենարան:

■ Նախաներկի կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է. —Roիշտ բարձրացնել դենատուրացիայի ջերմաստիճանը և երկարացնել դենատուրացիայի ժամանակը:

A-2 մգ²⁺ համակենտրոնացում

The Mg²⁺ կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg2+ կոնցենտրացիան²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-3 rmերմակայուն պոլիմերազա

En Չափից մեծ ֆերմենտի քանակ - —Պակասեցրեք ֆերմենտի քանակը համապատասխանաբար 0.5 U ընդմիջումներով:

A-4 Կռման ջերմաստիճան

An Կռման ջերմաստիճանը չափազանց ցածր է .— increaseիշտ բարձրացնել կռացման ջերմաստիճանը կամ ընդունել երկաստիճան հովացման մեթոդը

A-5 PCR ցիկլեր

PC Չափից շատ PCR ցիկլեր —— Կրճատեք PCR ցիկլերի քանակը:

Հարց. Կպչուն կամ քսելու խմբեր

A-1 այբբենարան—————————––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––————————————————————————————————————————————————————————————————— -րագրի վերափոխում, փոխում այբբենարանի դիրքն ու երկարությունը ՝ դրա յուրահատկությունը բարձրացնելու համար. կամ կատարել ներկառուցված PCR:

A-2 Կաղապար ԴՆԹ

—— Կաղապարը մաքուր չէ —— Մաքրեք կաղապարը կամ հանեք ԴՆԹ – ն մաքրման հավաքածուներով:

A-3 մգ²⁺ համակենտրոնացում

—— Մգ²⁺ համակենտրոնացումը չափազանց բարձր է —— reduceիշտ նվազեցնել Mg– ն²⁺ համակենտրոնացում. օպտիմալացնել Mg- ը²⁺ կոնցենտրացիան մի շարք ռեակցիաներով `1 մմ -ից մինչև 3 մմ, 0.5 մմ միջակայքով` օպտիմալ Mg որոշելու համար²⁺ կոնցենտրացիան յուրաքանչյուր կաղապարի և այբբենարանի համար:

A-4 dNTP

—— dNTP– ների կոնցենտրացիան չափազանց բարձր է —— համապատասխանաբար նվազեցնել dNTP– ի կոնցենտրացիան

A-5 Կռման ջերմաստիճան

—— Շատ ցածր հալման ջերմաստիճան —— increaseիշտ բարձրացնել հալման ջերմաստիճանը

A-6 ցիկլեր

—— Չափից շատ ցիկլեր —— Օպտիմալացրեք ցիկլի համարը

Հարց. Որքա՞ն կաղապարային ԴՆԹ պետք է ավելացվի 50 μl PCR ռեակցիայի համակարգում:

Հ. Ինչպե՞ս երկարացնել բեկորները:

Առաջին քայլը համապատասխան պոլիմերազի ընտրությունն է: Սովորական Taq պոլիմերազան չի կարող սրբագրել 3'-5 'էզոնուկլազի ակտիվության բացակայության պատճառով, և անհամապատասխանությունը մեծապես կնվազեցնի բեկորների երկարացման արդյունավետությունը: Հետևաբար, սովորական Taq պոլիմերազը չի կարող արդյունավետորեն ուժեղացնել 5 կբ -ից ավելի թիրախային բեկորները: Հատուկ փոփոխությամբ կամ բարձր հավատարմությամբ պոլիմերազով Taq պոլիմերազը պետք է ընտրվի երկարացման արդյունավետությունը բարձրացնելու և բեկորների երկարատև ուժեղացման կարիքները բավարարելու համար: Բացի այդ, երկար բեկորների ուժեղացումը պահանջում է նաև այբբենարանի դիզայնի համապատասխան ճշգրտում, դենատուրացիայի ժամանակ, երկարացման ժամանակ, բուֆերային pH և այլն: Կաղապարի վնասը կանխելու համար 94 ° C- ում դենատուրացիայի ժամանակը պետք է կրճատվի մինչև 30 վրկ կամ ավելի մեկ ցիկլով, իսկ ջերմաստիճանը մինչև 94 ° C բարձրացնելուց առաջ ՝ 1 րոպեից պակաս: Ավելին, երկարացման ջերմաստիճանը մոտ 68 ° C- ով սահմանելը և երկարացման ժամանակը նախագծելը `1 կբ/րոպե արագության համաձայն, կարող են ապահովել երկար բեկորների արդյունավետ ուժեղացում:

Հ. Ինչպե՞ս բարելավել PCR- ի ուժեղացման հավատարմությունը:

PCR- ի ուժեղացման սխալի մակարդակը կարող է նվազեցվել ՝ օգտագործելով բարձր հավատարմությամբ տարբեր ԴՆԹ պոլիմերազներ: Մինչ այժմ հայտնաբերված Taq ԴՆԹ -ի պոլիմերազներից Pfu ֆերմենտն ունի ամենացածր սխալի տոկոսադրույքը և ամենաբարձր հավատարմությունը (տես կցված աղյուսակը): Ֆերմենտի ընտրությունից բացի, հետազոտողները կարող են հետագայում նվազեցնել PCR մուտացիայի արագությունը `օպտիմալացնելով ռեակցիայի պայմանները, ներառյալ բուֆերային կազմի օպտիմալացումը, ջերմակայուն պոլիմերազի կոնցենտրացիան և PCR ցիկլի օպտիմալացումը:

Գրեք ձեր հաղորդագրությունը այստեղ և ուղարկեք մեզ

Ապրանքների կատեգորիաներ

ԻՆՉՈ ԸՆՏՐԵԼ ՄԵ

Ստեղծման օրվանից մեր գործարանը մշակում է առաջին համաշխարհային կարգի արտադրանք ՝ պահպանելով սկզբունքը
որակի առաջին հերթին: Մեր արտադրանքը ձեռք է բերել գերազանց հեղինակություն արդյունաբերության մեջ և արժեքավոր վստահություն նոր և հին հաճախորդների շրջանում:

ՀԱՐQՈՄ